Cell Freezing Medium Plus (1x)

Especially suitable for lymphocyte and stem cell cryopreservation

Catalog Number：PZ210R

01/產品概述

細胞藥物作為繼化學藥、生物藥之后出現的新型藥物在臨床上的應用越來越廣泛。尤其，干細胞治療和免疫細胞治療在退行性、損傷性、遺傳缺陷性疾病以及腫瘤的治療中具有巨大的優勢和廣闊的發展前景，而高效安全的細胞制劑是細胞治療中的關鍵因素。在細胞培養中，細胞凍存是最關鍵環節之一，尤其在細胞治療、細胞存儲中對細胞凍存更有特殊要求。

傳統的程序降溫法使用的凍存液主要配方為培養基、血清、DMSO。血清大多采用胎牛血清，含有動物源性物質，成分復雜，血清中未知成分和病毒等感染物質會給凍存帶來影響與風險。該方法在科研上廣泛使用，但是顯然已經不能適應現今細胞治療的應用場景。

針對干細胞和免疫細胞的凍存，LeapWal Biotech推出一款Cell Freezing Medium Plus (1x)，是一種化學成分明確、無動物源成分、使用醫藥級原料的即用型細胞凍存液，尤其適合淋巴細胞和干細胞的凍存。這款產品操作簡單，無需程序降溫，無動物源性蛋白，不含血清，病毒、病菌和支原體等污染可能性低，不僅能有效、安全地保護細胞，同時，使用藥用級原料，所有成分均明確，極大降低批次間差異。適用于干細胞、免疫細胞以及大多數細胞系凍存。

02/產品組分

03/保存條件

冰袋（wet ice）運輸。4℃保存，有效期12個月。若長期不用，可-30℃至-10℃保存，有效期24個月。

04/產品特點

即用型細胞凍存液，無需程序降溫，可直接凍存于-80℃冰箱，長期保存（>5年）

安全性高，無動物源性蛋白，不含血清，病毒、病菌和支原體等污染可能性低

復蘇后的細胞存活率優異，復蘇率高達90% 以上，細胞活力好

使用藥用級原料，所有成分均明確，極大降低批次間差異

05/實驗流程概要

06/實驗步驟

一：細胞凍存步驟

1. 選擇處于指數生長期的細胞，按照常規方法收集貼壁細胞或懸浮細胞于離心管中。

2. 1000 rpm-2000 rpm，離心5分鐘，收集培養細胞沉淀，棄上清液。

3. 加入適量4℃預冷的LeapWal Cell Freezing Medium Plus(1x) 重懸細胞，制成細胞懸液。

? 按照細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存液的量，推薦凍存密度：1x10^6 至5x10^6cells/mL。

4. 將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中，建議每管1mL或1.5mL。

5. 直接將細胞凍存管放入-80℃超低溫冰箱中，可長期冷凍保存。如果想放入液氮中長期保存，需先放入-80℃冰箱至少12小時，方可移至液氮罐中長期保存。

二：凍存細胞復蘇步驟

1. 在15 mL離心管中加入5-10 mL平衡至室溫的*培養基。

2. 從-80℃冰箱/液氮中取出凍存的細胞，立即放入37℃水浴鍋或其他細胞復蘇設備中，迅速解凍。

3. 將凍存管中的細胞懸液逐滴轉移至預先準備好的含*培養基的離心管中，1000 rpm-1500 rpm，離心5分鐘，收集細胞沉淀，棄上清（操作時小心，切勿將細胞沉淀移去）。

4. 加入適量平衡至室溫的*培養基重懸細胞，接種到事先準備好的培養容器中，輕輕搖晃培養容器，使細胞分布均勻。

5. 鏡檢細胞后，可根據各自研究的需要和方法進行細胞常規培養。培養5-24h后，觀察細胞狀態，可視情況更換新鮮細胞培養液。

07/適用范圍

LeapWal Cell Freezing Medium Plus(1x) 適用于干細胞、免疫細胞以及大多數細胞系凍存。該款凍存液使用藥用級原料，化學成分明確，適合細胞儲存、細胞治療以及科學研究等不同場景使用。

08/質量控制

LeapWal Cell Freezing Medium Plus(1x) 通過嚴格的內毒素、滲透壓、pH測試和無菌檢測（細菌、真菌和支原體檢測）。

09/注意事項

1. 若長期不用，本產品可-30℃至-10℃保存，再次使用時，請在2-8℃融化LeapWalTM  Cell Freezing Medium Plus(1x)，避免反復凍融。

2. 使用LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 凍存細胞后，應盡量減少凍存細胞在外存放時間，盡快移入-80℃超低溫冰箱長期保存。

3. LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 尤其適合淋巴細胞或干細胞凍存，建議使用本產品凍存細胞時，先對其進行試驗性凍存、復蘇、培養的預實驗，確認性能后再進行正式凍存。

4. 該產品在室溫條件下放置的時間不宜過長，以免影響凍存效率。

5. 免責聲明: 本公司將不為任何不正當使用此產品所發生的意外負責。

6. 為了您的健康安全，請規范操作，穿戴實驗服與手套開展實驗。

7. 本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及治療。

10/實驗案例分析

一、凍存細胞復蘇存活率檢測

1. 選擇處于對數生長期的淋巴細胞，按照常規方法收集細胞于離心管中。

2. 1000 rpm，離心5分鐘，收集培養細胞沉淀，棄上清液。

3. 加入適量4℃預冷的LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 、K公司凍存液、B公司凍存液分別重懸細胞，制成細胞懸液。凍存密度為1x106 cells/mL。

4. 將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中，每管1mL，放入-80℃冰箱中，冷凍保存。

5. 凍存12個月后，進行細胞復蘇，對復蘇后的細胞進行臺盼藍染色，統計細胞存活率。

二、凍存細胞復蘇生長曲線檢測

1. 選擇處于對數生長期的淋巴細胞，按照常規方法收集細胞于離心管中。

2. 1000 rpm，離心5分鐘，收集培養細胞沉淀，棄上清液。

3. 加入適量4℃預冷的LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 、K公司凍存液、B公司凍存液分別重懸細胞，制成細胞懸液。凍存密度為2x105 cells/mL。

4. 將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中，每管1mL，放入-80℃冰箱中，冷凍保存。

5. 凍存1個月后進行細胞復蘇，對復蘇后的細胞進行臺盼藍染色，繪制生長曲線。

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